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人鼠elisa試劑盒不同類型的樣本的處理辦法
更新時(shí)間:2018-11-19   點(diǎn)擊次數(shù):1305次

正確的處理樣本是確保ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的一步,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理辦法。
血清

血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。

用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管收集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一個(gè)晚上,使血清分出。(將試管或離心管歪斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的分出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,細(xì)心搜集上清。主張將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。采血過程中應(yīng)防止溶血,由于紅細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)開釋具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為符號(hào)的
人鼠elisa試劑盒檢測中會(huì)有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。一起也應(yīng)防止細(xì)菌污染,由于菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP然后導(dǎo)致檢測的假陽性。
安排勻漿液

1)將安排樣本用PBS (0.01錨點(diǎn)錨點(diǎn)M, PH 7.4) 沖刷,洗去安排外表殘留的血液或雜質(zhì)。

2)將安排塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充沛

3)將安排按必定的份額參加預(yù)冷的PBS(臨用前參加蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。

4)吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。
尿液、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min,取上清即可檢測。總的來說,由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)確保一切樣本均為澄清的液體,沉積或懸浮物都應(yīng)離心去除。為了確保檢測的準(zhǔn)確性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個(gè)月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。

細(xì)胞裂解液

1)吸去培育板內(nèi)的培育基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培育基將細(xì)胞從培育板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。

2)搜集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培育基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。

3)參加適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前參加蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。一般6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需求150~250μL PBS重懸。

4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,重復(fù)凍融幾回,使細(xì)胞充沛裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以到達(dá)裂解的意圖。

5)4℃ 10000×g 離心10min,除掉細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。

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