競爭法ELISA試劑盒(也稱抑制或封閉法ELISA通過定量某種樣品分析物對預(yù)計(jì)信號的干擾，來測定該分析物在樣品中的含量，可通過以下方式進(jìn)行：微孔板用一種分析物或一種對靶標(biāo)分析物具有特異性的抗體包被(即直接法和間接法)，再添加一種有部分某種檢測的靶標(biāo)分析物，以競爭結(jié)合抗體上的位點(diǎn)。信號與分析物含量呈負(fù)相關(guān)，因此，如果靶標(biāo)分析物的濃度較分析物高，靶標(biāo)分析物競爭性結(jié)合標(biāo)記抗體，參考信號將會較靶標(biāo)分析物的濃度較低的情況增強(qiáng)。
競爭法的理論基礎(chǔ)是抗體，只有在抗體基礎(chǔ)上，兩種抗原才會形成競爭關(guān)系。該方法一般用來檢測具有較少表位的小分子物質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)概要
以直接競爭法ELISA試劑為例，將特異性抗體吸附于固相載體，加入待測抗原(標(biāo)準(zhǔn)品或樣本)標(biāo)記的檢測抗原，二者競爭與固相抗體結(jié)合，然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，經(jīng)過溫育和洗滌后加入顯色底物。顯色的深淺與樣品中待測物質(zhì)含量呈負(fù)相關(guān)。
準(zhǔn)備所有的試劑和梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品。板條加入洗液靜置浸泡30 秒。
標(biāo)準(zhǔn)品孔加入2倍倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品；非特異性結(jié)合(NSB)和大結(jié)合(B0)孔加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或培養(yǎng)基。
血清/血漿：樣本孔加入樣本；細(xì)胞培養(yǎng)上清：樣本孔加入細(xì)胞培養(yǎng)上清。
除了Blank和非特異性結(jié)合(TA)孔空白，NSB孔加入1×檢測緩沖液，其余每孔加入稀釋的偶聯(lián)物。
封膜，室溫孵育1小時，洗滌6次。
除了TA和Blank孔，其余每孔加入稀釋的HRP標(biāo)記的鏈霉親和素。
封膜，室溫孵育30分鐘，洗滌6次。
TA孔加入稀釋的HRP標(biāo)記的鏈霉親和素。
每孔加入顯色底物,避光,室溫孵育5 - 30分鐘。
每孔加入終止液,30分鐘內(nèi)，在450nm波長檢測OD值，參考波長570nm或630nm。
注：以上步驟是以上海晶抗生物ELISA試劑盒為參考，不同廠家的試劑盒操作步驟可能不一樣，開始實(shí)驗(yàn)前一定要仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書哦~
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