原代細(xì)胞是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞.這里的組織主要指:組織器官、外周血及胚胎等.由于原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，繁殖一定的代數(shù)停止生長(zhǎng).所以一般認(rèn)為:培養(yǎng)的原代的1代和傳代到10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。晶抗生物為大家總結(jié)了原代細(xì)胞的提取的整個(gè)操作過(guò)程，一起來(lái)看看吧！
原代細(xì)胞的提取的整個(gè)操作過(guò)程：
1.整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺(tái)下進(jìn)行，所有的器材要高壓消毒。2.根據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10mlkg3%濃度的麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不僅可以消毒，也可以讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)制去皮毛的時(shí)候不會(huì)沾到剪刀或組織上。
3.用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有公共廣播公司的注射器插入心尖，同時(shí)在右心耳處剪開(kāi)一個(gè)小口，緩慢推動(dòng)注射器，隨著心臟的跳動(dòng)，將體內(nèi)的血液沖洗出來(lái)。
4.取出小鼠的肺部組織，將肺組織切成小米粒樣的大小，置于預(yù)冷的Hbss中反復(fù)沖洗幾次。
5.將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶一天用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面，4度過(guò)夜，小鼠處理，將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中，使其溫度恢復(fù)至37度)，置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下，消化4個(gè)小時(shí)。
6.消化4小時(shí)后，加入RPMI1640培養(yǎng)基(有10%血清、1%雙抗、1%內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子)10M|(添加培養(yǎng)基，可以是正常培養(yǎng)時(shí)的2倍量)，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)(繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞貼壁情況適當(dāng)調(diào)整)。
7.24小時(shí)后，取出肺組織，鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，換液。
8.原代細(xì)胞的提取和培養(yǎng)是很慢的過(guò)程，一般需等到24小時(shí)后，才能在鏡下看到些許細(xì)胞群，一周到兩周后才會(huì)看到鵝卵石樣的排列情況。
9.原代細(xì)胞2-3天換液一次，因?yàn)閮?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)形成單層時(shí)，會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象.所以，內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)接近單層時(shí)就可以傳代了，不要等到長(zhǎng)得非常滿(mǎn)。
上海晶抗生物結(jié)合多年細(xì)胞生物學(xué)經(jīng)驗(yàn)，為廣大客戶(hù)提供直接、周到、完善的售后服務(wù)，客戶(hù)可按需訂購(gòu)，如果您對(duì)我們的產(chǎn)品有任何疑問(wèn)，或?qū)ξ覀兊姆?wù)有任何意見(jiàn)或建議，歡迎您直接與原代細(xì)胞量大從優(yōu)客服聯(lián)系，我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)。
上海晶抗生物工程有限公司
地址：上海市金山工業(yè)區(qū)亭衛(wèi)公路6558號(hào)9幢2441室
版權(quán)所有：上海晶抗生物工程有限公司 備案號(hào)：滬ICP備16026504號(hào)-5 總訪問(wèn)量：645040 站點(diǎn)地圖 技術(shù)支持：智慧城市網(wǎng) 管理登陸
